PCR, au polymerase chain reaction, ni mbinu ya kisasa ya maabara ambayo hutumiwa sana katika dawa na nyanja zingine za kisayansi. Uchunguzi wa PCR wakati mmoja ulikuja kuwa mafanikio ya kweli katika sayansi.
Maelezo
Quantitative PCR ni aina ya PCR ya wakati halisi.
Hii inaeleweka kama lahaja ya PCR, ambapo kinetiki za mmenyuko hurekodiwa kila mara, ambayo huwezesha kutathmini kwa ubora maudhui ya mfuatano mahususi wa nyukleotidi ya DNA katika mchanganyiko changamano wa molekuli.
Njia ya kiasi cha PCR itajadiliwa kwa undani zaidi hapa chini.
Kiini cha uchambuzi
Njia za kitamaduni na serolojia hutumika mara nyingi kutambua maambukizi. Chini ya kwanza, antibodies kwa pathogen ya kuambukiza katika seramu ya damu imedhamiriwa. Katika pili, nyenzo za kibaiolojia zilizochukuliwa kutoka kwa mtu mgonjwa hutumiwa kupanda kati maalum ambayo ni nzuri kwa ukuaji wa makoloni ya pathogen. Utambuzi katika zote mbilikesi inaweza kudumu siku au wiki.
Uchunguzi wa PCR unaweza kufanywa kwa nyenzo tofauti za kibaolojia ambazo hupatikana kutoka kwa mtu mgonjwa. Damu na vyombo vingine vya habari vya kiafya, kifiziolojia na kibaiolojia na viowevu hufanya kama sampuli. Unaweza kufanya kinyesi cha PCR au mkojo.
Maambukizi ya kawaida na ya virusi mara nyingi hutambuliwa na kiasi cha PCR, kwa kuwa huenda isiwe rahisi kutambua kwa sababu ya hali maalum ya mchakato wa patholojia unaosababishwa nao. Kuamua maambukizi hayo, inachukua muda, wakati ambapo antibodies huanza kuzalishwa katika mwili, kuamua na mbinu za serological. Lakini hili halikubaliki katika baadhi ya matukio.
Njia ya kutekeleza
Njia ya PCR - utambuzi wa maambukizi katika maabara katika sampuli zilizotengwa na mgonjwa (in vitro).
Ili kufanya mmenyuko wa msururu wa polimerasi, seti ya vitendanishi maalum inahitajika.
Nyenzo za majaribio huletwa kwenye mirija ya majaribio yenye vitendanishi. Mirija ya majaribio huwekwa kwenye kifaa maalum - amplifier ya PCR, ambayo imeundwa ili kukuza (kuongeza idadi) ya vipande vya RNA au DNA inayotaka, amplifier ya PCR inafanya kazi kwa hali ya mzunguko. Katika mzunguko wowote, ikiwa sampuli zina mlolongo wa RNA au DNA ya pathojeni, basi nakala zaidi na zaidi za chembe za asidi hizi za nucleic hujilimbikiza katika suluhisho. Unaweza kubainisha kuwepo kwa pathojeni, na kiasi chake katika sampuli.
Aina za PCR
Uchambuzi wa ubora wa PCR hukuruhusu kupata matokeo yafuatayo:
- hasi wakati kisababishi magonjwa cha kuvutia hakipatikani kwenye sampuli;
- chanya ikiwa mfuatano utapatikana katika sampuli ambazo ni tabia ya pathojeni fulani.
Kwa matokeo chanya ya PCR, tunaweza kuzungumza kwa usahihi wa 95% kuhusu kuwepo kwa maambukizi yaliyotambuliwa. Wakati huo huo, usahihi wa seti za PCR zinazotumiwa kwa madhumuni ya uchunguzi hufikia 100%.
Kwa kawaida 5% ya matokeo yasiyo sahihi hubainishwa na sababu ya kibinadamu. Kwa mfano, ukiukaji wa mbinu ya uchanganuzi na uhifadhi wa vitendanishi unaweza kupunguza kwa kiasi kikubwa usahihi wa utafiti.
PCR ya Kiasi inafafanua dhana ya wingi wa virusi. Inawezekana kubainisha ni seti ngapi za DNA za pathojeni zilikuwa kwenye sampuli zilizochukuliwa kutoka kwa mgonjwa.
Ukali wa maambukizi ni sawia moja kwa moja na ongezeko la idadi yao. Unaweza pia kubainisha mafanikio ya tiba ya kupunguza wingi wa virusi.
Uwasilishaji kwa PCR biomaterial
Kiasi cha PCR hufanyika katika kliniki, hasa asubuhi. Wakati wa ziara ya daktari, mgonjwa ataambiwa kile kinachohitajika kuchukuliwa: kufuta, smears, mkojo au damu. PCR inaweza kugundua vimelea vya magonjwa bila kujali kiwango cha uchafuzi wa nyenzo.
Kwa uchanganuzi chanya, kwa nadharia, uwepo wa pathojeni moja tu katika sampuli inahitajika. Kwa mazoezi, wanajaribu kuunda hali nzuri zaidi. Kuna baadhi ya mapendekezo kwa hili:
- wakichukua kukwarua au usufi kutoka sehemu za siriviungo, unahitaji kujiepusha na kujamiiana siku tatu kabla ya utafiti;
- huwezi kujipaka dawa za kuua bakteria au kujisafisha kabla ya uchambuzi;
- saa tatu kabla ya kuchukua smear kutoka kwenye urethra, unahitaji kuwa na subira na sio kumwaga matumbo yako.
Usifuate sheria hizi unapochangia damu.
Je, matokeo ya uchanganuzi wa kiasi cha PCR yanafasiriwaje?
Tathmini ya kiasi cha matokeo yaliyopatikana
Katika idadi ya hali za kliniki, tatizo la ufanisi wa matibabu na / au mienendo ya mchakato wa patholojia inaonekana. Maswali hayo yanafaa hasa wakati wa kuchunguza watu wenye maambukizi ya muda mrefu (virusi vya ukimwi wa binadamu, hepatitis B na C). Wakati wa kugundua, zinatokana na ukweli kwamba mkusanyiko wa amplikoni (bidhaa za PCR) ni sawia na uwepo wa nakala za jeni inayotakiwa katika sampuli iliyochambuliwa.
Bila shaka, kwa kuzingatia matokeo ya kiasi cha PCR hufanywa na gel electrophoresis pamoja na utafiti wa ukubwa wa mawimbi maalum ya PCR. Pia, sharti la tathmini sahihi ya kiasi cha matokeo yaliyopatikana ni sampuli chanya za udhibiti wa kuaminika zilizo na idadi inayojulikana ya nakala za jeni inayotaka (kwa mfano, nakala elfu moja za jeni la hepatitis C kwa mmenyuko mmoja wa PCR). Mchanganuo kadhaa wa mfululizo wa udhibiti wa kiasi huruhusu mikondo ya urekebishaji kuzalishwa na hutumiwa kutathmini maudhui ya jenokopi za kimatibabu katika vielelezo vya kimatibabu.
Katika ufafanuzi wa kiasi cha PCR, mafanikio muhimu yamekuwa uundajivichunguzi vya DNA vya umeme ambavyo huongezwa kwa mchanganyiko wa majibu wakati huo huo kwa kutumia vianzio rahisi na kukuruhusu kufuatilia mchakato wa PCR kwa wakati, yaani, PCR ya wakati halisi.
Mbinu ya TaqMan inarejelea usanisi wa vichunguzi vya DNA vya umeme ambavyo ni mahususi kwa sehemu ya kati ya amplikoni na vina lebo mbili kwenye ncha. Mojawapo ni lebo ya fluorescent, ya pili ni molekuli ya kuzima kwa umeme huu.
Kifaa maalum, ambacho ni mseto wa fluorimeta na kipaza sauti cha thermoblock, hufanya vipimo vya mara kwa mara vya fluorescence katika kila tube ya majaribio (kanuni ya PCR ya wakati halisi). Baada ya mizunguko 20-40 ya PCR, mikunjo ya mtu binafsi itapatikana kwa kila sampuli. Idadi ya nakala za jeni inayotakikana iliyo katika sampuli ya jaribio inaweza kukokotwa kutoka kwa mikondo ya urekebishaji kwa sampuli za udhibiti.
Pia, kipengele muhimu cha utekelezaji wa PCR kwa njia ya fluorescent ni kwamba hakuna haja ya kufungua mirija yenye mchanganyiko wa PCR wakati wa kuzingatia matokeo. Hii inapunguza uwezekano wa uchafuzi wa chumba na bidhaa za ukuzaji, na hakuna haja ya kutenga maeneo maalum ya kazi kwa electrophoresis.
Nakala ya kiasi cha PCR inaonyesha nini?
Ni nini kinagunduliwa?
Kupitia mbinu kama vile kiasi cha PCR, mabadiliko ya ubora katika jeni hupatikana: viambajengo, ufutaji na mabadiliko ya pointi. Lakini pamoja na baadhi ya matatizo ya urithi, dalili zinazolingana huonekana kutokana na mabadiliko katika maudhui ya jeni fulani.
AsanteUchambuzi wa kiasi hutoa matokeo ya nambari, mara nyingi katika IU / ml. Hii ina maana kwamba katika mililita moja ya sampuli ya majaribio, idadi fulani ya nakala za RNA au DNA ya pathojeni, iliyopimwa katika vitengo vya kimataifa, ilipatikana.
Kulingana na ukubwa, ukali wa maambukizi hutambuliwa. Damu kwa kawaida hupimwa ili kubaini wingi wa virusi, kwani virusi husogea kwa uhuru katika damu wakati wa ugonjwa.
Vipengele
PCR kiasi katika kipimo cha damu ina vipengele viwili.
- Uchambuzi unafanywa ikiwa kuna vianzio au deoxyribonucleoside trifosfati, ambazo zimewekwa lebo ya umeme au mionzi ili kubaini kwa usahihi maudhui ya bidhaa iliyoundwa ya PCR.
- Katika mchakato wa PCR, malizia majibu mapema kabla ya bidhaa nyingi za PCR kuonekana. Hii ni kutokana na ukweli kwamba katika hatua ya mwisho ya kueneza, wakati kuna bidhaa nyingi za PCR, enzyme yenyewe na substrates hufanya kama viungo vya kuzuia majibu haya. Mwisho wa mzunguko unaofuata wa PCR chini ya hali kama hizi haujulikani tena na kuongezeka mara mbili kwa idadi ya bidhaa za PCR, tofauti ndogo za kiasi kati ya sampuli tofauti zinawekwa, ambazo hufafanuliwa wazi kabisa katika hatua za mwanzo baada ya kupita mfululizo wa mizunguko ya majibu..
Gharama ya uchunguzi wa PCR
Utafiti wa PCR una gharama, ambayo inategemea ni aina gani ya maambukizi yatakayojaribiwa, kwenye mbinu ya uchanganuzi na nyenzo za majaribio. Kuamua maambukizi moja, itabidi utoe ndani200-800 rubles. Ada ya kuchukua biomaterial pia huongezwa - takriban 400 rubles.
